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从土壤中分离到9株产生β-甘露聚糖酶的芽孢杆菌(Bacillus sp.)。Bacillus sp.M50250mL三角瓶摇瓶培养试验,以4%的魔芋粉为碳源,1.0%(NH4)2SO4为氮源,0.35%Na2CO3,30~34℃培养60h产酶达到高峰。酶活力为180~220u… … 相似文献
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下载全文 总被引:16,自引:0,他引:16在5L发酵罐中对重组碱性蛋白酶工程菌株BP071高产碱性蛋白酶的条件进行了研究,通过提高通气量和改变搅拌转速,BP071可在发酵40 h内达到产酶高峰,酶活力最高可达24480 u/mL。利用快速蛋白液相层析(FPLC)技术,建立了快速高效纯化碱性蛋白酶的方案。发酵液通过硫酸铵沉淀、DEAE-A-50脱色及聚乙二醇浓缩得粗酶,再经过CM-Sephadex-C-50、Sephadex-G-75柱层析后得到了单一组份的重组碱性蛋白酶,酶纯度提高了76.2倍。SDS-PAGE显示重组碱性蛋白酶分子量为28 kD。酶学性质研究表明,酶的最适作用pH为11,最适作用温度为60℃,具有良好的pH稳定性和热稳定性。Ca2+、Mg2+对酶的稳定性有促进作用,Hg2+、Ag+、PMFS和DFP能强烈抑制酶的活力。SDS和Urea对酶的活力无影响。… … 相似文献
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下载全文 总被引:16,自引:1,他引:16通过研究影响转化效率的诸因素,最终找到一种快速、高效酵母完整细胞转化法。整个转化步骤能在1.5h内完成。在实验中发现:小牛胸腺DNA的加入,在加入DNA后随即加入PEG4000;将42℃热冲击时间从5min延长到25min;热冲击后直接将转化混合物涂布到选择性平板上能得到高效转化效率。所用四种类型质粒的转化效率如下:Yrp;3.5—7.2×104(线性pcN60/BamHⅠ:1·6×105);Yep: l·7—2.6×104(线性YEpl3/BarnHⅠ:8×104),Ycp:3.7×104;YIp5/stuI:7.6×103。用快速法检测的7株受体菌的转化能力都达到104个转化子/μg DNA。… … 相似文献
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总被引:16,自引:0,他引:16
以球孢白僵菌(Beauveria bassiana)1316为出发菌株,通过紫外线和高能电子束分别诱变分生孢子,采用平板透明圆法初筛和摇瓶培养复筛的方法,经3轮诱变,筛选到5株高产突变株。其中一株最高产的定名为Beauveria bassiana 1316-V1,其壳聚糖酶活力是… … 相似文献
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下载全文 总被引:15,自引:0,他引:15poIFNα1基因中含有大量的大肠杆菌稀有密码子,为了获得高表达,使用了大肠杆菌的偏爱密码子,人工合成了poIFN|α1成熟蛋白编码基因。在保留编码蛋白序列的同时,使其5′端A+T的含量增加到最大限度,并将其终止密码子改为TAA。将合成的poIFNα1成熟蛋白编码基因插入原核单纯表达载体pRLC中,转化大肠杆菌DH5α。实现了poIFNα1在大肠杆菌中的高效表达,表达产物以包涵体形式存在。纯化的包涵体经含DTT的6 mol/L盐酸胍的变性液溶解及含GSHGSSG的复性液复性处理,复性后的表达产物浓缩后经凝胶层析纯化,细胞病变抑制法测定表明,重组poIFNα1具有较高的抗病毒活性,约为6.4x106u/mg。… … 相似文献
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