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为探索制备UNO肽修饰普鲁士蓝纳米颗粒(UNO peptide-Prussian blue nanoparticles, UNO-PBNPs)的方法及体外靶向M2型巨噬细胞的功能,本研究通过水热合成法制备普鲁士蓝纳米颗粒(Prussian blue nanoparticles, PBNPs),并利用异双功能偶联法在其表面修饰甘露糖受体靶向UNO肽(CSPGAKVRC);采用扫描和透射电子显微镜观察纳米颗粒的形貌特征,考察其粒径、Zeta电位及分散稳定性;运用X射线衍射等方法分析纳米颗粒结构表征;通过细胞计数试剂盒(cell counting kit-8, CCK-8)和溶血实验评估其生物安全性,并对其体外M2型巨噬细胞靶向性能进行初步探究。结果显示,制备的UNO-PBNPs呈均匀立方体形貌,平均粒径为(202.00±4.21) nm,呈负电荷,且分散均一、稳定性良好。在浓度≤200 μg/mL时溶血率均低于5%,具有较好的生物相容性。激光共聚焦成像结果显示,与M2型巨噬细胞共孵育后,异硫氰酸荧光素酯(fluorescein 5-isothiocyanate, FITC)标记的UNO-PBNPs在细胞内有效累积,呈现明显荧光信号。流式细胞术定量分析显示其细胞内平均荧光强度(6 019.00±346.04)较未修饰组PBNPs (4 054.00±379.14)显著增强(P<0.001)。本研究制备的UNO-PBNPs具有一定的M2型巨噬细胞靶向特性,为肿瘤微环境递送PBNPs提供了一种潜在方法,并为肿瘤免疫抑制微环境重塑奠定了基础。… … 相似文献
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【背景】土壤中大部分磷元素以难溶性磷酸盐的形式存在,不能被植物吸收利用。由于溶磷微生物能够将这类难溶性磷转化为可被植物吸收的有效磷,因此在提高土壤中磷的生物利用度和调节磷转化过程中发挥着重要作用。【目的】筛选高效的溶磷菌株,并探究其抗逆能力和促生特性,为微生物肥料的研发提供优质菌种资源。【方法】通过形态学、生理生化鉴定和16S rRNA基因序列分析对菌株进行鉴定;从盐浓度、酸碱性、温度和干旱方面研究菌株的抗逆能力;从产铁载体、产氨和分泌植物激素能力研究菌株溶磷和促生特性;利用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱（ultra-high performance liquid chromatography-quadrupole time-of-flight mass spectrometry,UPLC-TOF-MS）分析有机酸成分。【结果】从新疆小麦根际土壤中筛选到1株具高效溶磷能力的菌株,鉴定为肠杆菌属（Enterobacter）;菌株对氯化钠的耐受性为10%、pH 4.5-9.5、PEG6000的耐受性为80 g/L、生长温度范围为12-45℃,体现出良好的抗逆能力;该菌株能够同时溶解难溶性无机磷[Ca3（PO4）2]和难溶性有机磷（卵磷脂）;并且能分泌28.07 mg/L的植物激素吲哚乙酸（indole-3-acetic acid, IAA）,固氮量为23.18 mg/L,使番茄植株的株高、根长、茎粗、干重和鲜重较对照组分别提高66.67%、21.14%、34.93%、233.30%和211.70%,说明具有良好的促生功能;响应面优化后菌株对难溶性无机磷[Ca3（PO4）2]的溶磷量达902.1 mg/L,比优化前提升了30.1%,比文献报道的大部分溶磷肠杆菌高1.25-16.20倍;UPLC-TOF-MS分析确定菌株溶解磷酸盐的关键物质为葡萄糖酸。【结论】筛选的肠杆菌4-4-4具有优良的溶磷能力和促生潜力,并且表现出较强的抗逆能力,为微生物肥料的研发提供了菌种资源和理论基础。… … 相似文献
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糖化血红蛋白(hemoglobin A1c, HbA1c)结构特殊,其单克隆抗体难以制备。本研究致力于建立HbA1c单抗制备技术,创建HbA1c快速荧光免疫层析检测方法。人工合成3段糖基化多肽并制备完全抗原,利用斑点酶联免疫吸附实验(dot enzyme-linked immunosorbent assay, Dot-ELISA)及紫外吸收光谱法鉴定。通过完全抗原与天然HbA1c交叉免疫小鼠,筛选最优完全抗原并选择血清效价最高的小鼠进行单抗制备。经纯度与特异性验证,建立荧光免疫层析检测方法。本研究制备并筛选出效价为1:512 000的最优完全抗原,融合脾细胞获得4株特异性HbA1c抗体(纯度>90%),最佳抗体与抗原亲和常数(binding constant, Ka)值为1.67×1010 L/mol。基于此抗体成功建立荧光免疫层析检测方法,该方法15 min内即可检出结果,在3%–13%的HbA1c含量区间内有良好的线性范围(y=0.071 3x+0.005 6, R2=0.993 7),回收率98%–102%,精密性<10.00%,无非特异性反应。检测210份临床样本阳性符合率96.36%,阴性符合率97.00%,总符合率96.68%,受试者工作特征(receiver operating characteristic, ROC)曲线的曲线下面积(area under curve, AUC)为0.980 9,95%置信区间(0.961 0, 1.000 0),多中心验证结果一致性较高。本研究成功建立了HbA1c单抗制备关键技术,创建了HbA1c荧光免疫层析快速检测方法,为糖尿病及其并发症的早期诊断和长期管理提供了高效、便捷的检测手段。… … 相似文献
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【背景】作为地球上最古老的光合自养生物,蓝藻通过CO2浓缩机制（CO2-concentrating mechanism, CCM）提高光合作用暗反应的固碳效率,在生物固碳和农作物改良等领域有潜在的应用价值。羧酶体是蓝藻CCM的核心组分,由外壳蛋白和内部包裹的固碳酶RuBisCO以及碳酸酐酶自组装形成的类似二十面体的固碳机器。【目的】以从巢湖分离的蓝藻假鱼腥藻（Pseudanabaena minima） Chao 2107为研究对象,通过全基因组测序、蛋白序列分析和结构预测,阐明假鱼腥藻Chao2107羧酶体的各蛋白组分序列和结构特点,旨在为羧酶体的自组装和高效固碳机理研究提供基础。【方法】通过第三代测序技术拼接获得Chao 2107的全基因组序列,完成羧酶体基因簇的定位和注释,通过序列比对及AlphaFold结构预测等方法对羧酶体各蛋白组分的一级序列和结构特点进行深入分析。采用生化手段系统研究羧酶体的多种外壳蛋白间的相互作用模式。【结果】系统发育分析表明,2021年7月份从巢湖分离的蓝藻属于Pseudanabaena minima分支,因此命名为假鱼腥藻（Pseudanabaena minima） Chao 2107。假鱼腥藻Chao 2107中心碳代谢通路的基因组成非常保守,系统发育分析表明假鱼腥藻Chao 2107属于β-蓝藻,编码β-羧酶体和IB型的RuBisCO。β-羧酶体的大部分蛋白由保守的ccmKLMNO操纵子编码。进一步的序列和结构分析表明外壳蛋白CcmK2、CcmK3、CcmK4和CcmO具有类似的结构和组装方式,但是在N-端和C-端以及中心孔附近的结构差别很大,使得羧酶体外壳具有可塑性。生化实验发现三聚体外壳蛋白CcmO与六聚体外壳蛋白CcmK1、CcmK2、CcmK3、CcmK4均有相互作用,同时CcmO还特异性结合支架蛋白复合物CcmM-CcmN。【结论】假鱼腥藻Chao2107羧酶体蛋白组分的序列和结构分析为解析蓝藻β-羧酶体的结构和有序自组装的分子机理奠定了基础。… … 相似文献
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蛹虫草Cordyceps militaris作为冬虫夏草的重要替代品,其交配型(MAT1-1和MAT1-2)对其次级代谢产物的合成具有潜在调控能力,但具体影响尚不明确。本研究通过单孢分离和PCR扩增技术鉴定获得72株不同交配型蛹虫草菌株(MAT1-1型64株,MAT1-2型8株),利用黄豆粉氮源液体发酵体系,系统分析了不同交配型对胞内外多糖、虫草素及腺苷合成的影响。结果表明:(1) 交配型显著影响胞外多糖积累,混合接种组(MAT1-1+MAT1-2)的胞外多糖含量(2 782.1-3 540.4 mg/L)显著高于单菌株培养组(MAT1-1:1 977.9-1 980.3 mg/L;MAT1-2:1 634.2-1 935.2 mg/L,P<0.01),协同效应表现明显;(2) 虫草素合成主要由MAT1-2菌株驱动,其发酵液虫草素含量(25.1-39.8 mg/L)显著高于MAT1-1菌株(0-0.8 mg/L,P<0.01),且混合接种组未表现协同效应; (3) MAT1-2菌株菌丝体腺苷含量(2 268.46-2 285.67 mg/kg)显著高于MAT1-1菌株(242.32- 304.09 mg/kg,P<0.01),混合接种组腺苷水平介于二者之间,未表现协同效应。本研究揭示了交配型通过调控次级代谢途径影响活性成分合成的潜力,为基于遗传背景的蛹虫草定向发酵工艺优化提供了理论依据。… … 相似文献
《菌物学报》2025,44(8):250047
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