嗜热细菌木糖异构酶基因xylA在酿酒酵母中的高效表达

摘要:

采用PCR技术克隆得到嗜热细菌Clostridium thermohydrosulfuricum木糖异构酶(xylose isomerase XI)基因xylA,将该基因连接于酵母表达载体pMA91的磷酸甘油激酶(PGK)启动子下，得到重组质粒pBX1。通过LiAc完整细胞转化法将重组质粒转移至酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)H158受体菌中，得到重组酵母转化子H612，酶活测定结果表明，成功地在酿酒酵母中得到木糖异构酶的活性表达。SDSPAGE电泳结果显示出明显的特异性表达产物带，单体分子量为43kD。由酿酒酵母重组子H612产生的木糖异构酶最高酶活条件与其在自然状态下的一致，均为85℃，pH70，在这一条件下酶的比活力为10U/mg蛋白，而在接近酵母最适生长温度的30℃和40℃时，其相对酶活分别下降37%和11%。研究结果显示在酿酒酵母中得到木糖异构酶的活性表达，为进一步在酿酒酵母菌中建立新的木糖代谢途径打下了基础。

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