耐盐及苯乙酸、甲基对硫磷降解基因工程菌的构建

摘要:

H1（Halomonas sp.）是一株耐高盐浓度（18% NaCl, W/V）和降解苯乙酸的菌株，pDT3质粒为pUC19插入甲基对硫磷水解酶基因（mpd基因）构建而成。采用ＨindⅢ酶切，获得含有完整mpd基因片段，克隆到广宿主质粒pKT230和pBBR1MCS2上，构建成质粒pKTMP和pBBRMP。通过三亲杂交，在辅助质粒pRK2013的帮助下，将质粒pKTMP和pBBRMP转移到Ｈ１中，得到的工程菌HpKTMP和HpBBRMP具有耐盐、降解苯乙酸和水解甲基对硫磷的功能，其中HpBBRMP水解酶活性与亲本菌株甲基对硫磷降解菌（Pseudomonas putida）DLLE4相当，而HpKTMP水解酶活性要提高1倍左右。经过传代试验，证明了工程菌的稳定性。

Abstract: